La retinitis pigmentaria (RP) se caracteriza por
una degeneración de los fotorreceptores y de las células del epitelo
pigmentario (RPE) que se manifiesta con ceguera nocturna seguida por
constricción del campo visual y posterior pérdida global de la visión. El
mecanismo molecular de esta y otras distrofias retinianas hereditarias es
desconocido por la escasez de material humano y la poca fiabilidad de los
modelos animales debido a las diferencias fisiológicas y estructurales entre la
retina humana y la de los roedores.
El desarrollo de células de pluripotencia
inducida (iPSC) nos ofrece una oportunidad sin precedentes para obtener células
de pacientes con la enfermedad específica debido a su alta capacidad de
expansión y diferenciación a cualquier tipo celular humano. Esta tecnología se
ha usado para crear el modelo de RP in vitro que reproduce el fenotipo clínico.
Las células iPS derivadas de fibroblastos de
paciente de RP e individuo sano se han caracterizado y diferenciado a RPE. El
paciente es portador de la mutación en el gen MERTK(Ser331fs), responsable de
la trasmision de la señal en la fagocitosis de los segmentos exteriores de los
fotorreceptores, una actividad que realizan las células RPE diariamente, por lo
que esperamos que las células RPE de paciente resulten defectuosas en el ensayo
de fagocitosis.
La células iPS de paciente e individuo sano se
caracterizaron por Inmunocitoquímica para marcadores de pluripotencia y su
capacidad de diferenciación en las tres capas germinales mediante el ensayo de
teratoma en ratones inmunodeprimidos. Las iPSC se han diferenciado hacia
células RPE mediante protocolo de diferenciación espontánea observándose la
morfologia típica de células RPE. La expresión de genes y proteínas específicos
de RPE se detectó mediante RT-PCR y Western blott.
Las iPSC de ambos pacientes fueron teñidas con
marcadores de pluripotencia y han sido capaces de desarrollar las tres capas
germinales (ectodermo, mesodermo y endodermo) en el ensayo de teratoma, no
encontrando diferencias entre ambas. Una vez diferenciadas en RPE (iPS-RPE) se
observó la diferencia en la expresion de la proteína MERTK, mientras las demás
proteinas están expresadas igualmente en ambos.
Se ha conseguido obtener células RPE específicas
de paciente que carecen de la expresión de la proteína MERTK. En los siguientes
ensayos, esperamos ver defectos en fagocitosis con las iPS-RPE de paciente.
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